Stanovení

K nejpřesnějším metodám kvantitavního zjištění hladiny alkoholu v krvi patří analytické zkoušky (tj. rozbory) krve, především chemické a fyzikálně-chemické metody.
V současné době se považuje za objektivní stanovení alkoholu v krvi - stanovení pomocí plynové chromatografie, s následnou kontrolou metodou založenou na jiném principu, tj. Widmarkovou metodou, která se provádí v laboratořích specializovaných na tuto problematiku. Výsledná hodnota je průměr z více stanovení.
Metoda plynové chromatografie je založena na principu rozdělení jednotlivých těkavých látek z krve. Její předností je kvalitativně specifické a kvantitativně přesné stanovení koncentrace etanolu. Při stanovení plynovou chromatografií dochází k jednoznačnému rozlišení etanolu od dalších těkavých látek ve zkoumaném vzorku; jako je metanol, sekundární propanol, aceton, acetaldehyd, toluen a dalších látek. Stanovení plynovou chromatografií je do značné míry automatizováno. V moderních laboratořích obsluha přístroje pouze připraví vzorky k analýze do zásobníku a po spuštění přístroje kontroluje výsledky. U výsledku měření je třeba posuzovat shodu jednotlivých analýz a přítomnost jiných látek než etanolu.
Widmarkova zkouška je stále rozšířenou analytickou metodou poměrně velmi přesnou a spolehlivou. Její výhodou je vysoká citlivost a poměrná jednoduchost, která ji řadí mezi rutinní laboratorní úkony. Nevýhodou této zkoušky je její nespecifičnost, protože při Widmarkově zkoušce jsou mezi redukujícími látkami chovajícími se stejně jako etanol i jiné těkavé redukující látky, jako např. aceton, acetaldehyd, éter, benzin a jiné látky.
Stanovení alkoholu v krvi (i jiném biologickém materiálu) musí být ve shodě se závazným stanoviskem, které bylo schváleno výborem České společnosti soudního lékařství a soudní toxikologie ČLS JEP ke stanovení alkoholu v biologickém materiálu (citace):
1. Stanovení etanolu v krvi a v ostatním biologickém materiálu se provádí dvěma nezávislými standardizovanými metodami, a to plynovou chromatografií a jinou alternativní metodou, např. Widmarkovou metodou.
2. Stanovení plynovou chromatografiíí musí být specifické. Etanol nesmí mít shodný eluční čas jako látky, které se mohou v krvi vyskytovat jako důsledek choroby, otravy nebo hnilobných procesů.
Ke kalibraci se používají vodné roztoky etanolu. Pro výpočet koncentrace etanolu v krvi, resp. v ostatním biologickém materiálu je nutno používat příslušné korekční faktory. Pro stanovení „head space“ metodou se používají faktory dle Machaty.
Krev 1,08 1/F = 0,9259
Sérum 1,26 1/F = 0,7937
hemolytická krev, ev. sérum s krvinkami 1,15 1/F = 0,8696
Moč 1,00 1/F = 1,00
U krví z mrtvol se v odůvodněných případech provádí přepočet na 80% vody. Při stanovení etanolu v ostatním biologickém materiálu je nutno provést přepočet podle obsahu sušiny.
Přesnost a reprodukovatelnost metody musí být experimentálně ověřena. Správnost metody se ověřuje vnitřní kontrolou, to jest analýzou standardních roztoků etanolu. Expertní kontrola se provádí pověřenou referenční laboratoří. Koncentrace etanolu se vyjadřuje v SI jednotkách v g.kg-1.